色譜柱的反沖技術你了解嗎?

    更新時間:2020-08-21  點擊次數:5716
      色譜柱上基本都有->標志,表示流動相的流動方向,有的在色譜柱上印有“Nerver Lot Flow in the OppositeDirection”字樣,翻譯成“決不能反沖”的意思,色譜柱可以反沖嗎、色譜柱能不能反沖的問題爭議很大,但在我們工作中,用色譜柱反沖技術修復色譜柱收到柱效提高、柱效恢復的效果。
     
      一、分析氨基酸的離子交換柱,使用一段時間反柱效明顯下降,用NaOH活化,達不到要求,但用NaOH反沖活化可迅速恢復柱效,
     
      二、色譜柱使用一段時間后柱效下降,此時可拆下柱入口端螺帽,去掉1-2mm被污染填料,再用相同填料填滿,然后用流動相反沖一下,可使柱效恢復,因反沖可以改善柱頭死空間。
     
      三、因反沖可把沉積在過渡板上的細微顆粒沖走,有時也可用反沖技術使柱壓降低。
     
      一些反沖色譜柱的方法:
     
      (1)如果是已經保存好的色譜柱:1.反向接柱,先用 95 水:5 乙腈 0.2 ml/min,沖 20 倍柱體積;然后用C4H8O,0.2 ml/min,沖 20 倍柱體積;然后用 95 乙腈:5 水,0.2 ml/min,沖 20 倍柱體積;2.正向接柱,用 65乙腈水保存色譜柱。
     
      (2)如果是剛走完樣的色譜柱,那么請按照下列步驟進行:1.卸掉保護柱2.正向接柱,常規方法沖洗色譜柱(先 95水,后 95 乙腈或甲醇);3.反向接柱,先用 95 水:5 乙腈 0.2 ml/min,沖 20 倍柱體積;然后用C4H8O,0.2 ml/min,沖 20 倍柱體積;然后用 95 乙腈:5 水,0.2ml/min,沖 20 倍柱體積;4.正向接柱,用 65乙腈水保存色譜柱。
     
      注意:1.20 倍柱體積:2504.6mm 大概 80ml 1504.6mm 大概 48ml2.反向接柱時不要接檢測器。
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